DE MARCO, H1; SUTTON, G1. PERALTA, P.1 1 Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales – Universidad de Morón. Buenos Aires, Argentina.
Autor de correspondencia: hdemartaihotmail com
- Introducción
Los métodos de aislamiento celular por centrifugación en gradiente de densidad se realizan con polímeros sintéticos, debido a su equilibrio osmolar y de densidad El presente proyecto utiliza componentes de la propia sangre, carente de sustancias extrañas que puedan afectarlas, para lograr un método separativo de células mononucleares y polinucleadas con una buena vitalidad para ser utilizada en cultivos celulares o para estudios genéticos
Se utiliza la hemoglobina (Hb) presente en los eritrocitos como molécula separadora por sus características adecuadas de peso molecular densidad y osmolaridad
- Objetivo General
Crear una metodología segura para el aislamiento autólogo de células mononucleares y polinucleadas
- Metodología
Se preparó soporte de la centrifugación a partir de sangre periférica anticoagulada, por centrifugación, lavados y hemolisis de glóbulos rojos por enfriamiento a -70’C Posteriormente se trató con distintos buffers y anticoagulantes hasta encontrar la combinación óptima de densidad y osmolaridad A este material obtenido, se le agregó sangre entera anticoagulada del mismo individuo a fin de aislar capas bien definidas por centrifugación
- Resultados obtenidos
Se aisló una monocapa de células mononucieadas buscadas en esta primera etapa de la investigación y posteriormente extraídas en ambiente estéril La verificación de su aislamiento y datos sobre porcentaje de recuperación, vitalidad y viabilidad fueron realizadas por medio de tinciones a un pellet con coloración vital, conteo en cámara de Neubauer y en analizador automático hematológico.
- Conclusiones
Los resultados preliminares indican que esta metodología resultó apropiada para la separación de células mononucieadas de sangre periférica
- Palabras clave Autólogo – Gradiente de densidad hemoglobina